低溫離心機(jī)提取RNA酶的注意事項(xiàng)
RNA酶無處不在,在實(shí)驗(yàn)操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不妥當(dāng)?shù)牟僮鞫加锌赡茉斐蒖NA酶的污染,從而導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)的失敗。因此,嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,避免任何可能的污染,是保證實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。為此,必須作到以下幾點(diǎn):
1.如果可能,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)專門辟出RNA操作區(qū),盧湘儀低溫離心機(jī),移液器,試劑等均應(yīng)專用。RNA操作區(qū)應(yīng)保持清潔,并定期行除菌。
2.如果可能,在超凈臺中按照細(xì)胞培養(yǎng)的要求進(jìn)行操作,可以有效避免操作中引起的RNA酶污染。
3.操作過程中應(yīng)始終戴一次性橡膠手套,并經(jīng)常更換,以防止手、臂上的細(xì)菌和真菌以及人體自身分泌的RNA酶帶到試管或污染用具,盡避免使用一次性塑料手套。塑料手套不但常常造成操作不便,且塑料手套的多出部分常常在器具的RNase污染處和RNase-free處傳遞RNase,擴(kuò)大污染。
4.避免在操作中說話聊天。也可以戴口罩以防止引起RNA酶污染。
5.盡量使用一次性的塑料制品,盡量避免共用器具如濾紙,tips,tubes等,以防交叉污染。例如,從事RNA探針工作的研究者經(jīng)常使用RNase H,T1等,在操作過程中極有可能造成移液器、離心機(jī)等的污染。而這些污染了的器具是RNA操作的大敵。
6. 關(guān)于一次性塑料制品,建議使用廠家供應(yīng)的出廠前已經(jīng)滅菌的tips和tubes等。多數(shù)廠家供應(yīng)的無菌塑料制品很少有RNA酶污染,買來后可直接用于RNA操作。許多研究者用DEPC等處理的塑料制品,往往由于二次污染而帶有RNA酶,從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。
7.配制溶液用的酒精、異丙醇、Tris等應(yīng)采用未開封的新瓶。
8.所有舊塑料制品都必須用0.5M的NaOH處理10分鐘,用雙蒸水徹底沖洗,DEPC-H20浸泡過夜后滅菌。
9.無法用DEPC處理的用具可用氯仿擦拭若干次,這樣通??梢韵齊NA酶的活性。但氯仿會溶解某些塑料制品,應(yīng)當(dāng)注意。
10.RNase AwayTM試劑可以替代DEPC,操作簡單,價(jià)格低,且無毒性。只需將RNase AwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面,浸泡后用水沖洗去除,即可以快速去除器皿表面的RNase,并且不會殘留而干擾后繼實(shí)驗(yàn)。
11.如果您需要遠(yuǎn)距離運(yùn)輸或長期儲藏RNA樣品,建議先將標(biāo)本(細(xì)胞、組織)保存在RNA保存液(RNAwait、RNAlater)中,使細(xì)胞內(nèi)的RNA與RNA酶分離,在室溫可以保存7天,4℃可以保存4周,-20℃、-80℃可以長期存檔保存標(biāo)本,RNA質(zhì)量不受影響,用各類方法抽提仍可以獲得高質(zhì)量的RNA。
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